Detección rápida, multiplexada y sin enzimas de ácidos nucleicos mediante interruptores de ARN basados en aptámeros programables

Las tecnologías de diagnóstico rápidas, simples y de bajo costo, son herramientas cruciales para combatir enfermedades infecciosas. Nosotros describimos una clase de switchs de RNA basados en aptámeros, o aptaswitch, que tienen como blanco moléculas de ácido nucleico, los cuales, al ser reconocidos inician el ensamblado de un aptámero reportero.
Los aptaswitches pueden virtualmente detectar cualquier secuencia y proveer una intensa señal fluorescente sin la intervención de enzimas, generando señales en tan solo 5 minutos y permitiendo la detección de manera visual con equipamiento mínimo. Los aptaswitches pueden ser usados para regular el ensamblaje de siete aptámeros fluorogénicos diferentes, proveyendo así los medios generales de control de un arreglo multiplex de reporteros fluorescentes. A través del acople de reacciones de amplificación isotérmicas y los aptaswitches, alcanzamos sensibilidades de 1 copia de RNA/μL en reacciones de un solo recipiente. La aplicación de reacciones todo en uno multiplex en contra de RNA derivados de muestras clínicas de saliva generó una exactitud general del 96.67% para la detección del SARS-CoV-2 en 30 minutos. Los aptaswitches son por lo tanto herramientas versátiles para la detección de ácidos nucleicos que son de fácil integración en ensayos rápidos de diagnóstico.